液相色譜柱是由具有光學活性的單體，固定在硅膠或其它聚合物上制成手性固定相，通過引入手性環境使對映異構體間呈現物理特征的差異，從而達到光學異構體拆分的目的。
 

　　在手性拆分中，溫度的影響是很顯著的。低溫增加手性識別能力，但可能引起色譜峰變寬而導致分離變差。因此確定手性分析方法過程中要考慮柱溫的影響，確定柱溫。
 

　　要實現手性識別，手性化合物分子與手性固定相之間至少存在三種相互作用。這種相互作用包括氫鍵、偶級-偶級作用、π-π作用、靜電作用、疏水作用或空間作用。手性分離效果是多種相互作用共同作用的結果。
 

　　這些相互作用通過影響包埋復合物的形成，特殊位點與分析物的鍵合等而改變手性分離結果。由于這種作用力較微弱，因此需要仔細調節、優化流動相和溫度以達到分離效果。
 

　　液相色譜柱裝填實際上是有一定技巧和程序，可能還有一些運氣。一般使用高壓勻漿方法裝填。也就是能讓填料在溶劑內均勻地懸浮。然后用瞬間高壓壓實，這實際上用到了不同比例的勻漿液體，和合適的壓力。壓力太大，顆粒破碎，壓力太小，塔板數少。同時壓力需要穩定，不然分布不均，拖尾嚴重。同時還有頭上平整程度。套上套，就可以用了。
 

　　新柱活化，實際上是一個平衡的過程，除了用流動相平衡外，有時候還要用所測樣品對新柱進行平衡，特別是測定分子量比較高的多肽，尤其重要。因為分子量高的物質分子，擴散速度慢，平衡所需時間也相應較長。具體平衡方式也很簡單，多進幾次樣品，直到峰面積和保留時間穩定，再進行正式進樣測定。